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那麼，如何做到這一點呢？
首先是dna片段的製備！
常用以下方法獲得dna片段:1用限制性核酸內切酶將高分子量dna切成一定大小的dna片段;2用物理方法如超聲波取得dna隨機片段;3在已知蛋白質的氨基酸順序情況下。用人工方法合成對應的基因片段;4從rna反轉錄產生cdna。
其次是載體dna的選擇，這裏要知道，什麼是質粒。
質粒是細菌染色體外遺傳因子。dna呈環狀，大小爲1-200千鹼基對kb。在細胞中以遊離超螺旋狀存在。很容易製備。質粒dna可通過轉化引入寄主菌。在細胞中有兩種狀態，一是‘緊密型‘;二是‘鬆弛型‘。此外還應具有分子量小，易轉化，有一至多個選擇標記的特點。質粒型載體一般只能攜帶10kb以下的dna片段，適用於構建原核生物基因文庫，cdna庫和次級克隆。
柯斯s質粒是一類帶有噬菌體dna粘性末端順序的質粒dna分子。是噬菌體-質粒混合物。此類載體分子容量大，可攜帶45kb的外源dna片段。也能象一般質粒一樣攜帶小片段dna，直接轉化寄主菌。這類載體常被用來構建高等生物基因文庫。
而噬菌體dna。常用的λ噬菌體的dna是雙鏈，長約49kb，約含50個基因，其中50的基因對噬菌體的生長和裂解寄主菌是必需的，分佈在噬菌體dna兩端。中間是非必需區，進行改造後組建一系列具有不同特點的載體分子。λ載體系統最適用於構建真核生物基因文庫和cdna庫。
13噬菌體是一種獨特的載體系統，它只能侵襲具有f基因的大腸桿菌，但不裂解寄主菌。13dnarf在寄主菌內是雙鏈環狀分子，象質粒一樣自主複製，製備方法同質粒。寄主菌可分泌含單鏈dna的13噬菌體。又能方便地製備單鏈dna，用於dna順序分析、定點突變和核酸雜交。
接着是dna載體的連接。
